分析儀從單純實(shí)驗(yàn)效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn)：首先是簡單，不需要實(shí)驗(yàn)者另個(gè)計(jì)算配比混合，其次就是比例準(zhǔn)確，能得到保留時(shí)間重復(fù)性極好的實(shí)驗(yàn)效果但是，它有一個(gè)致命的缺陷，就是純水在流動(dòng)相瓶中幾天時(shí)間就會(huì)長細(xì)菌很多情況下不僅僅用純水作流動(dòng)相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細(xì)菌長得更迅速、，一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實(shí)驗(yàn)都要用新制備的純水，更要求在每次實(shí)驗(yàn)后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識(shí)不強(qiáng)，就是意識(shí)到了但多次使用中總有一兩次會(huì)遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因?yàn)橐合嗌V柱的堵塞是不可逆的。所以，寧可犧牲小小的保留時(shí)間的重復(fù)性，也不要用純水溶液作為流動(dòng)相的一組。從實(shí)際實(shí)驗(yàn)效果來說，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液以前我做過不同比例甲醇水的細(xì)菌總數(shù)實(shí)驗(yàn)，在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全殺菌了、，這樣可以有效排除長細(xì)菌的隱患，既可作流動(dòng)相，也可沖柱。就算是在配制流動(dòng)相時(shí)會(huì)計(jì)算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。原因三：不適當(dāng)操作1、在更換零件時(shí)選擇的型號(hào)有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時(shí)候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。2、樣品處理液凈化得不干凈，長期會(huì)在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。3、在使用手動(dòng)六通閥時(shí)，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動(dòng)的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。4、在使用金屬管路作出廢液管時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。
電子分析天平每段梯度大概保持5min然后接二通運(yùn)行梯度，記錄圖譜。每段梯度設(shè)置的時(shí)間與實(shí)際發(fā)生的梯度時(shí)間之差就是梯度延遲時(shí)間，階層的高度可以用來測量流動(dòng)相比例，這些階層可能有點(diǎn)模糊，是由系統(tǒng)中混合體積造成的；4、檢測完系統(tǒng)，就可以按照它的性能來設(shè)計(jì)方法。梯度方法轉(zhuǎn)換最大的問題是梯度滯后體積，如果知道儀器的滯后體積比最初開發(fā)方法的儀器大，就要自覺的在方法前加一段等度來抵消這一差別，如果目標(biāo)系統(tǒng)滯后體積小，就要在轉(zhuǎn)移方法的時(shí)候在方法開始加一段梯度延遲時(shí)間，如果比例差別是在梯度運(yùn)行中間出現(xiàn)的，也可以通過調(diào)節(jié)梯度圖譜來抵消這種差別，但是一般很少遇到過需要這么做的情況。5、初始流動(dòng)相沒有充分平衡。柱子已經(jīng)用初始流動(dòng)相平衡了，但在分析中，梯度變化很快，而柱子沒有用初始流動(dòng)相充分平衡好，這樣di一針時(shí)總是與后面的不一樣。但是如果轉(zhuǎn)移到有不一樣滯后體積的系統(tǒng)時(shí)，可能就是另一種情況。項(xiàng)目背景名稱：12種酚類色譜柱：月旭Ultimatereg，AQ-C184.6mm*150mm5mu，m流動(dòng)相A：水流動(dòng)相B：乙腈問題：柱子正?；罨M(jìn)樣，基線和整體出峰均不理想，分離度較差。1.柱子在運(yùn)輸或儲(chǔ)存過程中保存液發(fā)生變化，導(dǎo)致填料產(chǎn)生微小改變，碳鏈蜷縮，未舒展開來，對(duì)目標(biāo)物的保留造成影響；2.儀器系統(tǒng)存在梯度滯后，在梯度變化過程中，兩相混合不精準(zhǔn)，導(dǎo)致的物質(zhì)分離問題；3.目標(biāo)物受溶劑效應(yīng)影響；4.梯度變化過快，流動(dòng)相的洗脫能力太強(qiáng)，導(dǎo)致色譜峰未達(dá)到分離效果。1.測試梯度滯后體積和比例精確性；2.用初始流動(dòng)相0.2流速過夜平衡柱子；3.樣品用初始流動(dòng)相溶解（慎用，改變樣品溶劑后需要驗(yàn)證樣品溶液的穩(wěn)定性）；4.調(diào)節(jié)梯度，減緩洗脫速率，減小洗脫能力；基線和峰形大有改善，但是最后一個(gè)峰在梯度時(shí)間外出峰了。梯度變化中，水相速率增長較快，物質(zhì)保留變強(qiáng)，沒有獲得足夠的洗脫能力，最后一個(gè)物質(zhì)出峰較晚。
光譜儀FID系統(tǒng)停機(jī)時(shí)，必須先關(guān)氫氣熄火，然后再關(guān)閉溫度控制，當(dāng)柱溫降下后再關(guān)載氣和空氣如果開機(jī)時(shí)在FID溫度低于100℃時(shí)就通氫氣點(diǎn)火，或關(guān)機(jī)時(shí)不先熄火就降溫，就容易造成FID收集極積水而使放大器輸入級(jí)絕緣下降，會(huì)造成基線不穩(wěn)； 22、FID點(diǎn)火后，由于基始電流的作用，點(diǎn)火后電壓會(huì)高于原先值，高出的大小可大致判斷氣體凈化程度和色譜柱老化的好與不好； 23、FID放大器屏蔽鐵盒內(nèi)放有干燥劑（硅膠、分子篩類），用以保持放大器輸入級(jí)的高度絕緣性能。由于環(huán)境空氣中水份的影響，使用一段時(shí)間后，應(yīng)更換干燥劑或?qū)⒃瓉矸旁诶锩娴母稍飫┤〕?，?50℃下烘烤（活化）二小時(shí)再回用，這樣可降低噪音，保證基線穩(wěn)定性； 24、嚴(yán)禁柱溫超過固定相中固定液允許的使用溫度，一般柱溫低于允許使用溫度； 25、氣相色譜儀在關(guān)機(jī)時(shí)，先降柱溫然后關(guān)斷載氣氣源。氣相色譜儀氣相色譜儀氣相色譜儀詳細(xì)的操作方法_氣相色譜儀氣相色譜儀分析原理e國植物學(xué)家Tswet（茨維特）于1903年發(fā)現(xiàn)ldquo，色譜，Martin和Synge在1940年提出液一液分配色譜法（Liquid-LiquidPartitionChromatography），并在1941年提出用氣體代替液體作流動(dòng)相的可能性，11年之后James和Martin發(fā)表了從理論到實(shí)踐比較完整的氣液色譜方法（Gas-LiquidChromatography），因而獲得了1952年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。在此基礎(chǔ)上，1957年高雷（（M.J.E.Golay）開創(chuàng)了開管柱氣相色譜法（Open-TubularColumnChromatography），習(xí)慣上稱為毛細(xì)管柱氣相色譜法（CapillaryColumnChromatography）。在60年代末把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜，出現(xiàn)了液相色譜（HPLC）80年代初毛細(xì)管超臨界流體色譜（（SFC）得到發(fā)展:而在80年代初由JORGENSON等集前人經(jīng)驗(yàn)而發(fā)展起來的毛細(xì)管電泳（CZE），在90年代得到廣泛的發(fā)展和應(yīng)用，同時(shí)集HPLC和CZE優(yōu)點(diǎn)的毛細(xì)管電色譜在90年代后期受到重視[。到21世紀(jì)色譜科學(xué)將在生命科學(xué)等前沿科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮不可替代的重要作用。而G.Guiochon認(rèn)為GC和HPLC是在分析領(lǐng)域發(fā)展，極為成功的范例。在近代分析化學(xué)領(lǐng)域中，色譜分析法是一種新型的分離分析方法。色譜法可用于分離分析復(fù)雜的多組分混合物，是一種根據(jù)分子的不同遷移速度而達(dá)到分離的方法。色譜技術(shù)是建立在吸附、分配、離子交換、親和力和分子大小等基礎(chǔ)上的分離過程，它利用不同組份在兩相中的吸附能力、分配系數(shù)、離子交換能力、親和力或分子大小等性質(zhì)的微小差別，經(jīng)過連續(xù)多次在兩相間的質(zhì)量交換，使不同的組份得到分離。
高效金屬過濾器價(jià)格※這里特別指出一個(gè)細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動(dòng)相都會(huì)談到最后有一個(gè)過濾的步驟但是從我們長期使用的實(shí)際效果來說，只要能保證水的質(zhì)量，這一步完全可以也應(yīng)當(dāng)去除。原因有以下三點(diǎn)：（1）流動(dòng)相過濾在理論上有好處，但是，實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對(duì)于配比復(fù)雜的流動(dòng)相影響更大。（2）流動(dòng)相過濾在經(jīng)濟(jì)成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認(rèn)是比較容易損壞的設(shè)備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計(jì)算，過濾片的成本會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。（3）流動(dòng)相過濾對(duì)于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個(gè)預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個(gè)小時(shí)的時(shí)間。這個(gè)成本也不能忽視。（4）在實(shí)際工作未發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相不過濾會(huì)對(duì)柱壽命有任何影響。
合金分析儀用歸一法確定各脂肪酸的組成比例二．脂肪酸甲酯的制備1.液態(tài)油樣：取油樣200mg置入10ml容量瓶中，加入乙醚-正己烷（2：1）2ml，甲醇2ml及0.8mol/LkOH（NaOH）.CH3OH溶液2ml振勻靜置5min，加水至刻度，取上層溶液進(jìn)樣（0.2uL）分析。2.固態(tài)牛羊脂肪酸酯化法：乙醚甲酯化取約0.1克樣品于10ml容量瓶中，加2-3ml無水甲醇在水浴上加熱溶解后，滴加硫酸（分析級(jí)）5-8滴，充分搖勻后，放置10min，加3-4ml蒸餾水，0.5-1.0ml乙醚，劇烈搖動(dòng)，萃取1min靜置分層后，取上層清液0.5ul進(jìn)樣。三．儀器及材料1．氣相色譜GC-5890氫焰檢測器（FID）氣源：氮?dú)?，氫氣，空氣?．?dāng)?shù)據(jù)處理：N2000工作站及電腦3．色譜柱：￠4＊2米不銹鋼柱。4．分析級(jí)：乙醚，正己烷，甲醇，kOH（NaOH），蒸餾水5．10ml容量瓶四.儀器的控制柱溫：190℃汽化：260℃檢測：250℃靈敏度：3載氣：0.1MP進(jìn)樣量：0.2uL五．分析譜圖大豆油分析譜圖：花生油分析譜圖：菜子油分析譜圖：芝麻油分析譜圖：牛羊油分析譜圖：牛羊油（硬脂酸）分析譜圖：六．儀器配置：序號(hào)產(chǎn)品名稱型號(hào)/規(guī)格數(shù)量1氣相色譜儀（FID、毛細(xì)管進(jìn)樣系統(tǒng)、程序升溫、智能后開門）GC5890N68911臺(tái)2空氣發(fā)生器KJA-2L1臺(tái)3氫氣發(fā)生器KJH-3001臺(tái)4高純氮?dú)饧兌?9.999%1瓶5色譜工作站反控KJ58901套6專用色譜柱30m*0.32mm60m1根7標(biāo)準(zhǔn)品1瓶8電腦和打印機(jī)1套。
抑制器： 抑制器最重要的是內(nèi)部要保持濕潤，所以如果長期不使用一定要定期進(jìn)行沖洗，沖洗完畢后將幾個(gè)與大氣相同的端口封閉保存另外如果沒有液體經(jīng)過抑制器時(shí)，絕對(duì)不能開電流，否則內(nèi)部的交換膜會(huì)被電解干裂，造成損壞。 電導(dǎo)檢測器： 也是定期沖洗，如果你一段時(shí)間不使用儀器，你可能會(huì)看到電導(dǎo)值居高不下，就是因?yàn)橐种破鲀?nèi)或者電導(dǎo)池內(nèi)的水變質(zhì)引起的，多沖洗一下就會(huì)降下來，但是也說明了維護(hù)不夠，最好是定期通水維護(hù)為好。離子色譜儀離子色譜儀離子色譜儀的維護(hù)_離子色譜儀。
6、考慮光源是不是正?！ ?、考慮濃度是否在線性范圍內(nèi)。有時(shí)候定量時(shí)濃度太高或太低都會(huì)產(chǎn)生較大的分析誤差。 8、考慮取樣方式是否正確，每次取樣后是否對(duì)針頭外面的附著液進(jìn)行清除?！ ?、高效液相色譜儀的計(jì)算機(jī)軟件編制可能存在問題。對(duì)比可以適當(dāng)改變軟件。高效液相色譜儀高效液相色譜儀高效液相色譜儀峰面積差別很大的解決方法_高效液相色譜儀液相色譜速率理論方程式 在范第姆特方程模型基礎(chǔ)上，根據(jù)液相色譜的特點(diǎn)作了某些修正，得到如下幾種液相色譜速率理論方程式?！ ?、高效液相色譜速率理論方程式： 其中渦流擴(kuò)散項(xiàng)： 分子擴(kuò)散項(xiàng)： 傳質(zhì)阻力項(xiàng)： 其中包括：稱為流動(dòng)的流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力系數(shù)，稱為滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力系數(shù)，稱為固定相中的傳質(zhì)阻力系數(shù)?！ 「咝б合嗌V速率理論方程詳細(xì)表達(dá)式： 式中， dp——色譜柱填料平均粒徑； df——固定相有效液膜厚度； U——流動(dòng)相平均流速； Dm——組分分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)； Ds——組分分子在固定相中的擴(kuò)散系數(shù)； wm——由色譜柱和填充的性質(zhì)所決定的系數(shù)； ws——與容量因子k有關(guān)的系數(shù)； wsm——與顆粒微孔中被流動(dòng)相所占據(jù)部分的分?jǐn)?shù)以及容量因子k有關(guān)的系數(shù)。其余符號(hào)含義同前面。 從上式中可以看出，液相色譜和氣象色譜的速率方程式基本一致，主要區(qū)別在于液相色譜中影響柱效的主要因素是傳質(zhì)阻力項(xiàng)，而份子擴(kuò)散項(xiàng)對(duì)柱效的影響不像氣相色譜那樣明顯。
為了保證液相色譜儀使用的穩(wěn)定性，我們對(duì)于設(shè)備使用環(huán)境是有一定要求的，包括：通風(fēng)、照明、供電、環(huán)境溫度和濕度以及潔凈度，其中：1、通風(fēng)：使用液相色譜儀分析過程中，由于流動(dòng)相中含有揮發(fā)性有機(jī)溶劑（甲醇、乙睛等）會(huì)產(chǎn)生有害氣體，對(duì)儀器中的光學(xué)元件帶來腐蝕，應(yīng)注意儀器室的通風(fēng)，以排除室內(nèi)有害氣體、保持空氣清新通風(fēng)主要有兩種方式：一種自然通風(fēng)，定時(shí)打開門窗，讓內(nèi)外空氣對(duì)流，另一種是強(qiáng)制通風(fēng)，如用通風(fēng)柜、排風(fēng)扇等，及時(shí)將有害氣體排出室外。2、照明：室內(nèi)照明要光線適中，避免陽光直射。為避開直射光線對(duì)儀器操作、觀測的影響，儀器（顯示屏）應(yīng)側(cè)向光線。實(shí)驗(yàn)室窗戶要掛窗簾，以便隨時(shí)調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度。3、供電：液相色譜室應(yīng)設(shè)有照明電源和動(dòng)力電源，動(dòng)力電可供儀器運(yùn)行使用。為減少噪音的干擾，儀器應(yīng)遠(yuǎn)離瞬時(shí)供電的大功率電器設(shè)備，如大型電動(dòng)設(shè)備、電梯、空調(diào)系統(tǒng)等。為保證HPLC輸液泵的精度，必須要保證穩(wěn)定的輸人電壓，為此，建議色譜室應(yīng)設(shè)有和儀器負(fù)荷相當(dāng)?shù)姆€(wěn)壓電源。4、環(huán)境溫度和濕度：適宜的溫度和濕度是保障HPLC儀正常運(yùn)行、性能穩(wěn)定的必要條件。一般要求室溫在20一30℃之間，日溫度變化2一3℃，不要波動(dòng)太大，否則，在開機(jī)分析時(shí)會(huì)影響色譜分離，夏季一定要控制室溫不要超過30℃，溫度太高會(huì)使流路系統(tǒng)產(chǎn)生氣泡，影響檢測器的正常工作（如熒光檢測器）。室內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)控制在60%以下。
8、按結(jié)構(gòu)可分：臺(tái)式液相色譜儀和落地式液相色譜儀9、按分離規(guī)?？煞郑何⑿鸵合嗌V儀、小型液相色譜儀和大型液相色譜儀。10、按功能可分：分析型液相色譜儀和制備型液相色譜儀。液相色譜儀被廣泛用于合成化學(xué)、石油化學(xué)、生命科學(xué)、臨床化學(xué)、藥物研究、環(huán)境監(jiān)測、食品檢驗(yàn)及法學(xué)檢驗(yàn)等領(lǐng)域。 反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8C4C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。一、反相色譜柱的選擇1．柱子的PH值使用范圍 反相柱優(yōu)點(diǎn)是固定相穩(wěn)定，應(yīng)用廣泛，可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料，使用時(shí)一定要注意流動(dòng)相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動(dòng)相的PH值小于2時(shí)，會(huì)導(dǎo)致鍵合相的水解；當(dāng)PH值大于7時(shí)硅膠易溶解；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱人口處會(huì)塌陷。同樣填料各種不同牌號(hào)的色譜柱不盡相同。
多為金屬或玻璃制作有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。而對(duì)于液相色譜而言，色譜填料的選擇有時(shí)候恰恰決定了樣品分析效果的好快。今天小編就圍繞常見的色譜填料種類，講解一下，應(yīng)該如何針對(duì)儀器使用環(huán)境對(duì)色譜填料進(jìn)行合適的選擇?！ 」枘z填料 硅膠填料主要應(yīng)用正相色譜及反相色譜柱中，正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)（NH2APS）和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團(tuán)的極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強(qiáng)弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如：正乙烷（Hexane）氯仿（Chloroform）二氯甲烷（MethyleneChloride）等。反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合先被沖出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。
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