光譜儀普通液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只需嚴厲依照操作請求停止操作，普通不會呈現(xiàn)問題，當然啫喱需求特別指出的是關(guān)于液相的日常維護頤養(yǎng)很重要，比方活動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，假使不堅持，很容易招致色譜柱梗塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等不用要的毛病，糜費時間其次，操作人員在配制液相剖析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨完成，以免不用要的偶爾誤差。4.液相裝置環(huán)境：液相色譜儀應盡量裝置于程度、遠離振動、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處置系統(tǒng)分隔開，一個是避免色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個是為減少對人體的危害。各位小伙伴在實驗分析中應該都遇到過這類問題，在液相色譜中，對于組分復雜的樣品，采用一種色譜體系，往往很難得到理想的分離效果，要么分離時間太長，要么分離度太差。這種情況，采用梯度洗脫就可以縮短分析時間，提高分離效果。下面和大家分享一則梯度微調(diào)實例，一起感受下梯度微調(diào)對分離效果的奇妙影響吧。1、盡量在能長時間測試該項目的儀器上開發(fā)方法；2、需要了解系統(tǒng)的性能，避免出現(xiàn)儀器系統(tǒng)改變后不能重現(xiàn)的問題；3、要知道系統(tǒng)的兩個基本情況：梯度滯后體積和比例精確性。這可以在同一個實驗里得到這兩個數(shù)據(jù)：參考《JJG7052014液相色譜儀檢定規(guī)程》中《梯度誤差》實驗：在B溶液（0.1%丙酮）后加紫外檢測器，設(shè)置一個多階層的梯度，B溶液以5%的幅度從0%變到100%，流速與平常一樣，流速為1mL/min。每段梯度大概保持5min。然后接二通運行梯度，記錄圖譜。每段梯度設(shè)置的時間與實際發(fā)生的梯度時間之差就是梯度延遲時間，階層的高度可以用來測量流動相比例，這些階層可能有點模糊，是由系統(tǒng)中混合體積造成的；4、檢測完系統(tǒng)，就可以按照它的性能來設(shè)計方法。
定硫儀一支注射器暫時不用時（比如下班），更要徹底清洗，否則殘留在其中的樣品可能將針芯粘牢，造成注射器報廢使用自動進樣器的用戶也應注意此問題，zui好是經(jīng)常更換和清洗注射器。定期檢查并清洗進樣口襯管儀器長期使用后，會發(fā)現(xiàn)襯管內(nèi)積有焦油狀物質(zhì)，這是樣品中不揮發(fā)成分造成的。此外還有顆粒狀物質(zhì)積存（隔墊碎屑，樣品中的固體物質(zhì)），這些都會干擾分析的正常進行。因此要定期檢查，及時清洗。注意襯管中填充一些經(jīng)硅烷化處理的石英玻璃毛，即可提高樣品的汽化效率，又能防止隔墊碎屑進入色譜柱造成堵塞。保留完整的儀器使用記錄這是儀器的履歷，應逐日記錄，包括操作者、分析樣品及條件、儀器工作狀態(tài)等等。一旦儀器出現(xiàn)問題，這是查找原因的重要資料。工廠企業(yè)往往有嚴格的操作程序，這方面要做的好一些。有一些實驗室有時不太注意這個問題，實在不是一個好的習慣。更換零部件要逐一進行修理儀器時，不要一次更換多個部件，那樣會造成故障原因的判斷失誤。
甲烷分析儀從目前的售價看，四元低壓的泵比二元高壓的并低不了太多，但他們節(jié)約的成本是不少的四元低壓梯度系統(tǒng)采用單泵加梯度比例閥來實現(xiàn)，因為比例閥是在泵前的，并且各流路的溶劑在比例閥里就混合在一起了，所以是泵前、低壓混合。一般地，對于常規(guī)分析來說，四元低壓梯度也可以滿足需要；如果分析樣品成份復雜、對重現(xiàn)性要求較高，或者需要在低流量下進行梯度分析，還是選擇高壓梯度好一些。當然，現(xiàn)在美國SSI（LabAlliance）公司推出的四元高壓梯度泵，在保證高精度分析的同時，也解決了流動相數(shù)量受限制問題。液相色譜從性能上比較，四元高壓肯定優(yōu)于四元低壓。四元高壓的混合比例是通過改變泵的流速來獲得的，通常泵的流速都是很準的，所以混合的精度也是很高的。四元低壓梯度的混合比例是通過控制不同流路的電磁閥的開閉時間長短來控制的，理論上混合的比例也是準確的，但是實際上電磁閥的開閉會有一個延遲，無論它動作多么快，總還是需要一點時間的。比如A路和B路各50%混合，在單位時間內(nèi)，A路和B路的電磁閥各開通50%的時間，這時問題不大，電磁閥的延遲影響可以通過調(diào)整補償系數(shù)來盡量彌補。但是如果極端一點的情況，A路99%，B路1%，這種情況下單位時間內(nèi)，A路的電磁閥開通99%的時間，B路只占1%，時間是很短的，這時B路電磁閥的延遲就影響很大了，甚至可能延遲的時間比工作的時間還要長。這是兩個管路的情況，假如四個管路同時工作，其結(jié)果可想而知。高壓梯度就不會存在這種問題了。
金屬過濾器檢查進樣口、注射器、墊圈和色譜柱都正常，可就是不出峰，無意中發(fā)現(xiàn)進樣口柱頭壓達不到設(shè)定值，總是偏高，這時才懷疑是ECD檢驗器出口不暢通由于ECD的排放物有一定的放射性，所以ECD出口是引到室外的。當時是秋冬之交，雨水進入到ECD排出口之后凍住了，因此造成儀器ECD的出口堵塞，柱頭壓居高不下，氣體在氣路中無法流動，也就無法載樣品到檢測器，所以不出峰。安捷倫氣相色譜儀7890B 二、基線問題 氣相色譜儀基線波動、飄移都是基線問題，基線問題可使測量誤差增大，有時甚至會導致儀器無法正常使用。 1、遇到基線問題時應先檢查儀器條件是否有改變，近期是否新?lián)Q氣瓶及設(shè)備配件。 2、如果有更換或條件有改變，則要先檢查基線問題是不是由這些改變造成的，一般來說，這種變化往往是產(chǎn)生基線問題的原因。有些人在工作中就遇到過這種情形：新載氣純度不夠，換過載氣之后，基線逐漸上升（由于載氣凈化管的原因，基線不是馬上變化的）。第二天開機之后，基線非常高，并伴有基線強烈抖動，所有峰都湮沒在噪音中，無法檢測。經(jīng)過檢查，問題出現(xiàn)在新?lián)Q的載氣上，重新更換載氣后，立即恢復了正常。 3、當排除了以上可能造成基線問題的原因后，則應當檢查進樣墊是否老化（應養(yǎng)成定期更換進樣墊的好習慣）； 4、石英棉是不是該更換了； 5、襯管是否清潔。值得一提的是，清洗襯管時可先用試驗zui后定容的溶劑充分浸泡，再用超聲波清洗幾分鐘，然后放入高溫爐中加熱到比工作溫度略高的溫度，zui后再重新安裝。
高效金屬過濾器操作高效液相色譜儀的過程中可能遇到多種多樣的問題，遇到問題不可怕，主要在于我們?nèi)绾畏治鼋鉀Q問題，下面滕海儀器分享幾組高效液相色譜儀常見故障的處理操作液相色譜儀可能遇到壓力波動大，峰分叉的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象是由于系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使兩者不能密封，這時我們需要注意觀察流動相的量，保證不銹鋼氯氣沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動相要充分脫氣，如果是單向閥與閥座之間有異物就得拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。當液相色譜儀出現(xiàn)既無壓力指示也沒有液體流過該怎么辦呢？我們首先分析原因，出現(xiàn)這一現(xiàn)象無非兩種原因：大量氣泡進入泵體或者泵密封墊圈磨損。如果是種情況，在泵作用的同時，用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣；如果是第二種情況則需要更換密封墊圈。。
當流動相中含有緩沖鹽時則過濾是必要的如前所述當緩沖溶液放置一段時間（視環(huán)境溫度不同而異夏季一般不超過48h冬季一般不超過一周）后在使用前還應重新過濾所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng).45μm（.22μm則更好）孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系二者不可混用以防止濾膜溶解而造成污染。裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換以避免濾器因過載而起不到過濾作用。3.凈化樣品當樣品中含有對色譜柱有損害的化學成分如產(chǎn)生永久性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機分子和強吸附性物質(zhì)以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團離子。在進樣前應盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。4.避免過高柱壓雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達6psi（磅/平方英寸）但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命避免的方法是（1）柱壓過高時盡可能采用較小的流速以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。（2）當流速較大時應采取流速梯度的辦法使流速分步到位。（3）使用手動進樣閥時進樣閥的切換要盡可能的快。否則超過2%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當使用多柱聯(lián)用時柱切換要避免在高壓下進行。
色譜柱每米降壓為75Kg/cm2以上高速——流速為0.1~10.0ml/min。高效——可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點：?速度快——通常分析一個樣品在15~30min，有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成。分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。柱子可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
3、FID的靈敏度與氫氣、空氣和氮氣的比例有直接的關(guān)系，因此要注意優(yōu)化一般三者的比例接近或等于1：10：1，如氫氣30~40ml/min，空氣300~400ml/min，氮氣30~40ml/min。另外，有些儀器設(shè)計有不同的噴嘴分別用于填充柱和毛細柱，使用時要查看說明書?！ ?、為防止檢測器被污染，檢測器溫度設(shè)置不應底于色譜柱實際工作的高溫度。一旦檢測器被污染，輕則靈敏度下降或噪聲增大，重則點不著火。消除污染的辦法是清洗，主要是清洗噴嘴表面和氣路管道。具體辦法是拆下噴嘴，依次用不同的溶劑（丙酮、lv仿和乙醇）浸泡，并在超聲波水浴中超聲10min以上。還可用細不銹鋼絲穿過噴嘴中間的孔，或用酒精燈燒掉噴嘴內(nèi)的油狀物，以達到徹底清洗的目的。有時使用時間長了，噴嘴表面會積碳（一層黑色的沉積物），這會影響靈敏度?？捎眉毤喖堓p輕打磨表面除去。清洗之后將噴嘴烘干，再裝在檢測器是進行測定。
2.進樣系統(tǒng)包括進樣器、各種進樣口和氣化室，樣品由進樣器注入氣化室，在氣化室高溫作用下瞬間氣化，然后在載氣的攜帶下進入與氣化室相連的色譜柱中3.分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)由色譜柱組成，它是色譜儀的核心部件，其作用是分離樣品，色譜柱主要有兩類:填充柱和毛細管柱。色譜柱由色譜柱管、柱內(nèi)填充物等組成。柱管一般采用金屬管或玻璃管，色譜柱在恒溫柱箱內(nèi)工作。4.控制系統(tǒng)控制系統(tǒng)主要的任務有:控制所有的溫度及時間程序、控制各種檢測器（（FIDNPD和FPD）的自動點火、色譜圖的保存與再處理、樣品分析條件的保存、程序升溫、開/關(guān)檢測器、分渝不分流進樣器的時間等。5.檢測和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)樣品經(jīng)過色譜柱分離后，各成分按保留時間不同，順序地隨載氣進入檢測器，檢測器把進入的組分按時間及其濃度或質(zhì)量的變化，轉(zhuǎn)化成易于測量的電信號，經(jīng)過必要的放大傳遞給記錄儀或工作站，后得到該混和樣品的色譜流出曲線及定性、定量曲線，即色譜圖。所使用的檢測器主要有以下幾種:火焰離子化檢測器FID（FlameIonizationDetector）、熱導檢測器TCD（ThermalConductivityDetector）、電子俘獲檢測器ECD（ElectronCaptureDetector）氮磷檢測器NPD（NitrogenPhosphorDetector）、火焰光度檢測器FPD（FlamePhotometricDetector）、質(zhì)譜檢測器MSD（MassSpectrometryDetector），本文主要介紹TCD和FID兩種檢測器（1）熱導檢測器TCD（ThermalConductivityDetector），其基本原理是每種物質(zhì)都有導熱能力，而且導熱的能力大小不同，通過一個熱敏電阻來測定與熱敏電阻接觸的氣體組成變化情況。這種檢測方式雖然不是靈敏的，但是對所有樣品都有響應，是通用型的檢測器。（2）火焰離子化檢測器FID（FlameIonizationDetector）一般用的是氫火焰，其原理是在氫氣燃燒時，在火焰的上方會有一個溫度很高的區(qū)域，樣品在這個區(qū)域被離子化，形成一些正負離子，在火焰的周圍加上一個電場，讓離子定向移動，形成電流，經(jīng)過一系列放大后得到放大信號，也就是檢測到的信號。FID只對有機化合物有響應，為選擇性的檢測器。但是它的靈敏度較高，應用為廣泛，一般儀器上都是配雙柱雙氣路雙檢測器，單柱抗干擾能力差，穩(wěn)定時間長，雙柱的干擾一正一負正好抵消。
安裝新的密封圈后，進行zui初的ldquo，磨合期在至少350bar的反壓下泵入異丙醇15-30分鐘。這要通過使用原來的色譜柱或陰尼管線來產(chǎn)成壓力.。杭州森尼歐提供液相色譜儀色譜柱的選擇指南 現(xiàn)代液相色譜儀色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。一、硅膠基質(zhì)填料：1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其它具有極性官能團如胺基團（NH2APS）和氰基團（CNCPS）的鍵合相填料?！ ∮捎诠枘z表面的硅羥基（SiOH）或其它極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。 正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（MethyleneChloride）等。2、反相色譜 反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物?！ 悠妨鞒錾V柱的順序是極性較強的組份zui先被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
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